miRNA基因调控怎么做？一文带你轻松get常用研究方法_资讯推荐

之前介绍了如何选择研究的miRNA（文章名称：《研究miRNA，到底是研究5p成熟体还是3p成熟体呢？》）以及miRNA表达量的检测方法（文章名称：《茎环法or加尾法？哪种更适合你的miRNA检测？》），这次小编来讲讲miRNA过表达和干扰的常用研究方法。

miRNA作用机制

miRNA首先在细胞核内转录出较长的初级miRNA（pri-miRNA），然后在细胞核内由Drosha加工成前体miRNA（pre-miRNA），在Exprotin 5复合物的帮助下被转运出细胞核，在细胞质中由Dicer剪切成为成熟的miRNA（mature-miRNA），随即被整合进RNA沉默复合物（RISC）中，基于与mRNA完全或不完全配对来调节基因表达。

(资料图)

图1 miRNA作用机制

miRNA过表达

研究miRNA过表达通常有三种方法：（1）根据pri-miRNA序列构建过表达载体，选择pre-miRNA上下游在内的300bp以内的序列克隆到启动子下游；（2）根据mature-miRNA序列构建过表达载体，将mature-miRNA序列及其反向互补序列加上loop序列构建到载体上；（3）直接化学合成小片段mimics（mature-miRNA序列）。

其中，根据pri-miRNA序列构建过表达载体，载体转入细胞或实验动物体内后可利用miRNA加工机制获得成熟的miRNA并发挥作用，过表达效果较好，是最常用的一种过表达方法。

表1 miRNA过表达的研究方法

miRNA干扰

研究miRNA干扰通常有三种方法：（1）antango，合成mature-miRNA序列的反向互补序列构建到载体上；（2）sponge，一般是将4个mature-miRNA序列的反向互补序列用linker连接，合成相应序列，构建到载体上；（3）inhibitor，直接化学合成mature-miRNA反向互补序列。

sponge有多条mature-miRNA反向互补序列，相比单条序列，干扰效率更高，且II/III型启动子均可启动，使用范围更加广泛，是最常用的干扰方法。

表2 miRNA干扰的研究方法

注：由于miRNA干扰只是利用反向互补序列吸附miRNA，而非让miRNA降解，所以miRNA依然存在，使用qPCR检测其表达量没有变化是正常现象，可通过检测与其相互作用的靶基因的表达量来判断miRNA表达量是否下降。

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